选修1生物技术实践《课题3血红蛋白的提取和分离》新课标优质课教案设计

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二、缓冲溶液

1、缓冲溶液的作用是 。

2、调节缓冲剂的_____________可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。

三、电泳

1、原理

电泳利用了待分离样品中各分子 以及 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。

2、方法

两种常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使用 。为了消除______________对迁移率的影响，可以在凝胶中加入SDS。SDS能使蛋白质发生________________，使蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成 ，SDS能与各种蛋白质形成____________________，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，使电泳速率完全取决于 。

四、实验操作

蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。

（一）样品处理

1、红细胞的洗涤

洗涤红细胞的目的是 。分离红细胞时采用 速 时间离心（500r/min、离心2min），然后吸出上层透明的黄色 ，将____层暗红色的红细胞倒入烧杯，再加入五倍体积的 ，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。

2、血红蛋白的释放

在 和 作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

3、分离血红蛋白溶液

将搅拌好的混合液离心（2000r/ min、离心10 min）后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的 ，第2层为白色薄层固体，是 ，第3层是红色透明液体，这是 ，第4层是 。将试管中的液体用滤纸过滤，除去 ，于分液漏斗中静置片刻后，分出______层的红色透明液体。

（二）粗分离：

将血红蛋白溶液装入透析袋中，放入 中，透析12h。透析的原理是

。透析的目的是__________________________________________________________。

（三）纯化： 法

洗脱时，待 时，用试管收集。

（四）纯度鉴定：

五、操作提示

1、红细胞的洗涤