人教2003课标版《课题3血红蛋白的提取和分离》公开课教案下载

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学习难点：样品的预处理

色谱柱填料的处理和色谱柱的装填

自主学习：

一．基础知识——蛋白质提取和分离的原理

（一）分离生物大分子的基本思路

选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。

（二）蛋白质分离和提取的原理

根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。

（三）蛋白质分离和提取的方法

1.凝胶色谱法（又叫分配色谱法）

凝胶：一些微小的多孔球体，由多糖类化合物构成，如葡聚糖、琼脂糖，内含许多贯穿的通道，具多孔的凝胶就叫分子筛。

概念：根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。

原理：大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；

小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。（如图5—13 a）

过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子（如图5—13 b）

洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。

缓冲溶液——洗脱剂

①组成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。

如H2CO3/NaHCO3，HC/NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等

②配制：调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。

③作用：在一定的范围内，抵制外界酸和碱对溶液pH的影响，维持 pH基本不变

本课题所选用的缓冲溶液是磷酸缓冲液，其目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究(活性)

2.电泳法

概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电