选修1 生物技术实践生物《第四章 生物化学与分子生物学技术实践 第一节 生物成分的分离与测定技术 边做边学 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳》精品课教案

选修1 生物技术实践生物《第四章 生物化学与分子生物学技术实践 第一节 生物成分的分离与测定技术 边做边学 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳》精品课教案

3、具体过程：

A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。

B.（1） 混合物上柱；

（2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；

（3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。

（4） 不同的蛋白质分子完全分开；

（5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。

（二） 缓冲溶液：

1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。

2、 作用：能够抵制 的对溶液的 的影响，维持PH基本不变。

3、缓冲溶液的配制

通常由 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的 就可以制得 使用的缓冲液。

（三）电泳：

1、 概念：指 发生迁移的过程。

2、原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有 在 下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其

移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身 、 的不同使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。

3、分类：

琼脂糖凝胶电泳

聚丙稀酰胺凝胶电泳。

测定（ 蛋白质相对分子质量 ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳。

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。

为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入 。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是 。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于 。

二． 实验操作

蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定

1.　样品处理