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选修1生物技术实践《课题1DNA的粗提取与鉴定》集体备课PPT课件优质课下载
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
2、提取DNA的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分
3、DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反
讨论:
①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,思考在什么浓度下, DNA的溶解度最小? DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?
在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时,DNA的溶解度最大,浓度为 0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?
DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离
4、DNA在酒精溶液中的溶解性
5、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温,而DNA在80°C以上才会变性
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响
6、DNA的鉴定
① DNA与二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂
②甲基绿 (蓝绿色)
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
(一)实验材料的选取
1、材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取2~3种实验材料)
2、原则:凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但选用DNA含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大
动物细胞的破碎较易,例如,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可
(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液