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浙科版生物选修1 生物技术实践《生物技术概述 第四部分 浅尝现代生物技术 实验13 DNA片段的PCR扩增》优质课ppt课件
DNA
提取DNA的基本思路:
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
DNA的粗提取与鉴定
1.原理、方法和目的
基本原理
方法
目的
DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低
溶于NaCl溶液中并稀释
①NaCl溶液为2 mol/L时,DNA溶解,而部分蛋白质发生盐析生成沉淀,通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质
②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时,DNA析出,过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质
DNA不被蛋白酶所水解
加入嫩肉粉
嫩肉粉中含木瓜蛋白酶,水解蛋白质(酶的专一性)
DNA不溶于酒精溶液
加入冷却酒精(95%)
DNA析出,除去溶于酒精的蛋白质
DNA可被二苯胺染成蓝色
加入二苯胺,并沸水浴
鉴定DNA
高温
DNA耐高温
DNA和蛋白质对高温耐受性不同:蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温,而DNA在80℃以上才会变性。